蝦堿性磷酸酶（SAP）試劑

蝦堿性磷酸酶（SAP）試劑（Shrimp Alkaline Phosphatase,SAP)催化DNA和RNA 的5’和3’磷酸單脂的去磷酸化反應(yīng)，也可水解核糖和

脫氧核糖核苷三磷酸（NTP 和 dNTP）。蝦堿性磷酸酶在分子生物學(xué)研究中應(yīng)用廣泛，如去除DNA和RNA 末端的磷酸基團(tuán)，

用于后續(xù)的克隆和探針末端標(biāo)記。在克隆中，可使線性載體去磷酸化，防止自連。蝦堿性磷酸酶在65°C溫育5分鐘即可的、

不可逆的失活，因此，在連接或末端標(biāo)記之后，可以不用去除熱敏磷酸酶。基于以上特性，該酶是傳統(tǒng)去磷酸化酶--小牛腸堿性

磷酸酶（CIP）的替代物。

組分

組分名稱500U

rSAP (2 U/μl)250 μl

10×SAP Buffer1 ml

應(yīng)用

DNA 和 RNA 的去磷酸化

防止克隆載體的自連

制備5′末端標(biāo)記模板

活性定義

1單位指在37°C條件下，每分鐘水解1umol的pNPP（p-Nitrophenyl Phosphate）到pNP所需要的酶量。

儲(chǔ)存

-20℃可保存2年。

蝦堿性磷酸酶（SAP）試劑恒溫?cái)U(kuò)增使用策略及實(shí)例展示

應(yīng)用實(shí)例1：在以A3824-03或 A3828-03，用 LP1002引物組進(jìn)行的LAMP測(cè)試。Bst4.0 SYBR Green試劑可在標(biāo)準(zhǔn)定量PCR儀或恒溫?zé)晒鈨x上進(jìn)行反應(yīng)。以體外轉(zhuǎn)錄RNA為模板，1-6分別為1、10、100、1000、10e4和10e6Copies，NTC為ddH2O為模板。下圖為65℃反應(yīng)25min的檢測(cè)結(jié)果，可以看到檢測(cè)反應(yīng)<20min(達(dá)平臺(tái)期)。

應(yīng)用實(shí)例2： 用 LP1002引物組進(jìn)行的LAMP測(cè)試。OG變色法為終點(diǎn)變色策略，在反應(yīng)結(jié)束后，倒置反應(yīng)管，溶解管蓋上染料后，陽性樣本呈現(xiàn)出醒目的綠色，陰性表現(xiàn)出橙色，區(qū)分明顯。且該方法不受樣本類型限制，雜質(zhì)耐受性很好。以體外轉(zhuǎn)錄RNA為模板，1-6分別為1、10、100、1000、10e4和10e6Copies，NTC為ddH2O為模板。下圖為65℃反應(yīng)20min后檢測(cè)結(jié)果。

應(yīng)用實(shí)例3：A3825-01 紅黃變色反應(yīng)（肉眼觀察）

以 體外轉(zhuǎn)錄 RNA 為模板，1-6分別為1、10 、100、1000、104和106Copy，NTC為ddH2O為模板。 上圖為加樣結(jié)束反應(yīng)起

始前，下圖為 65 度反應(yīng) 30min 后。

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