His標簽蛋白純化試劑盒(耐變性劑型)使用説明

His標簽蛋白純化試劑盒(耐變性劑型)

使用說明：、

對于用鎳柱純化大腸桿菌中His標簽蛋白比較熟悉的使用者可以直接參考“6. 簡化的操作流程"。否則請參考如下詳細內容：

如下以最常見的大腸桿菌中表達純化His標簽重組蛋白為例，說明本產品的使用方法。在其它體系中表達時，請參考該表達體系的相關使用說明，并借鑒大腸桿菌中純化His標簽重組蛋白的使用說明。

大腸桿菌中His標簽重組蛋白的誘導表達：

如下以常用的IPTG誘導表達系統給予說明，誘導表達條件的優化請參照所使用的誘導表達體系的詳細說明。其它誘導表達系統請參考適當的使用說明進行。

挑取表達His標簽重組蛋白的單克隆，接種到3ml或10-20ml含適當抗生素的LB培養液中，培養過夜。

按照1:20的比例取培養過夜的菌液，接種到預熱至37oC并含適當抗生素的LB培養液中。例如取5ml培養過夜的菌液接種到100ml預熱至37oC并含適當抗生素的LB培養液中。具體的培養體積視需要純化的蛋白量而定，初步的鑒定培養3-10ml 即可；常規的表達純化，通常可考慮培養100-200ml；制備型的純化，培養體積可以達到1L或更大。如果希望取得更好的表達效果，建議按照1:100的比例接種過夜培養的菌液，但后續培養至相應的OD值需要更長的時間。

37oC常規培養約30-60min或更長時間，至菌液的OD600達到0.5-0.7，并且OD600最好接近0.6。

加入IPTG至終濃度為1mM，繼續培養4-5小時。

注：可以在加入IPTG前取出少量菌液同樣培養4-5小時后作為未誘導的對照，也可以在加入IPTG前直接取出少量菌液作為未誘導的對照。對于特定蛋白的誘導表達，最佳的IPTG濃度、誘導溫度、和誘導時間需要通過實驗確定。

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