HiFi One-Step RT-PCR Mix(電泳)試劑

HiFi One-Step RT-PCR Mix(電泳)試劑本試劑采用穩定高效的RT-PCR預混體系，是以RNA為模板進行一步法RT-PCR的專用試劑。其原理為用基因特異性引物進行反轉錄反應，獲得第一鏈cDNA（不可使用Oligo（dT）或Random Rimer合成第一鏈cDNA），再使用基因特異性正向引物和反向引物進行PCR擴增，在同一反應體系中一步完成從反轉錄到PCR的全部過程。反應體系中已含有電泳所需的指試劑（藍色和黃色），反應后可以直接進行電泳。

在本試劑中，將耐熱M-MLV反轉錄酶、Rnase Inhibitor、Hotstart高保真DNA聚合酶以及穩定劑等配制成50×One-Step Enzyme Mix預混液；反應Buffer、dNTP以及電泳指示染料配制成5×HiFi One-Step RT-PCR Buffer，因此使得操作更加簡單便，擴增產物可用于平端克隆和DNA測序。

組分

組分名稱250T

50×One-Step Enzyme Mix100 μl

5×HiFi One-Step RT-PCR Buffer1 ml

RNase Free H2O1 ml×3

注意：1.50×One-Step Enzyme Mix粘度高，第一次使用之前要離心收集至反應管底部，吸取時應緩慢小心。

2.由于使用了Hotstart高保真DNA聚合酶，反應配制可在常溫進行，但各組分應-20°C保存。

主要特征

耐熱M-MLV反轉錄酶可在55℃反應能更好的打開復雜二級結構，只需10min即可完成逆轉錄。

DNA聚合酶為熱啟動型高保真酶，能夠有效的抑制非特異性反應且具有較高的校正活性，酶激活僅需2min。

具有寬泛的模板量兼容性，10 ng~1μg都可有效擴增。

反應過程中無需開蓋，避免了操作過程中的污染危害。

儲存

請置于-20°C，可保存2年；避免反復凍融。

恒溫擴增使用策略及實例展示

應用實例1：在以A3824-03或 A3828-03，用 LP1002引物組進行的LAMP測試。Bst4.0 SYBR Green試劑可在標準定量PCR

儀或恒溫熒光儀上進行反應。以體外轉錄RNA為模板，1-6分別為1、10、100、1000、10e4和10e6Copies，

NTC為ddH2O為模板。下圖為65℃反應25min的檢測結果，可以看到檢測反應<20min(達平臺期)。

應用實例2： 用 LP1002引物組進行的LAMP測試。OG變色法為終點變色策略，在反應結束后，倒置反應管，溶解管蓋上染料后，陽性樣本呈現出醒目的綠色，陰性表現出橙色，區分明顯。且該方法不受樣本類型限制，雜質耐受性很好。以體外轉錄RNA為模板，1-6分別為1、10、100、1000、10e4和10e6Copies，NTC為ddH2O為模板。下圖為65℃反應20min后檢測結果。

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