檢測試劑盒(*肼微板法)

(Pyruvic acid，PA)又稱2-氧代丙酸，是參與整個生物體基本代謝的中間產物之一，可通過和三羧酸循

環實現體內糖、脂肪和氨基酸間的互相轉化，在三大營養物質的代謝聯系中起著重要的樞紐作用。是糖無氧

代謝的產物，科研工作者常將丙酮酸和乳酸一起研究，并用二者的比值推算循環衰竭的程度

。丙酮酸檢測可采用乳酸脫氫酶催化法或*肼比色法。

檢測試劑盒(*肼微板法)檢測原理是在酸性條件下，與*肼反應，生成-*

腙復合物，后者經氧化呈棕紅色，通過酶標儀測定520nm處吸光度，據此通過與標準曲線對比可以計算出PA水平。該試劑

盒可用于檢測植物、細胞或組織、血清等樣品中內源性的含量，尤其適用植物樣品含量的檢測。該試劑盒僅用

于科研領域，不宜用于臨床診斷或其他用途。

操作步驟(僅供參考)：

1、取內徑為8mm的玻璃試管2支，分別加入白陶土-腦磷脂混懸液0.2ml。

2、靜脈采血1ml，立即取下針頭，沿管壁向各試管注入血液0.5ml，立即混勻并啟動秒表計時，并置于37℃水浴中。

3、每隔10s輕搖試管一次，觀察管內血液流動情況，直至血液凝固。記錄血液凝固所需時間，即為ACT。

4、取2支試管血液凝固時間的平均值作為ACT 值。

計算：參考區間： (1.77±0.76)min

4、配制標準品工作液︰如果檢測血清、尿液等樣品，按取丙酮酸標準(6mg/ml):蒸餾水=1：99的比例配制，使濃度達到60μg/ml，如果檢測組織樣品按丙酮酸標準(6mg/ml) :組織勻漿液(1×)=1:99的比例配制，使濃度達到60μg/ml。

注意事項:

1、實驗材料應盡量新鮮，如取材后不立即使用，應存于-20°C.

2、實驗用蒸餾水不能含有二氧化碳，可用新煮沸且冷卻后的蒸餾水，并蓋緊口。

3、TA滴定液為堿性溶液，有腐蝕性，請小心操作。

4、TA標定液容易長菌，宜4℃保存，一旦發現有絮狀物請棄用。

5、果實中含酸量較少時可將TA滴定液適當稀釋后使用，可考慮用0.01~0.05M  TA滴定液進行滴定。

6、TA滴定液含量計算公式中，V0最好為3次空白測定的平均值。

7、如果所測樣品的濃度過高，應用TA Lysis Buffer工作液稀釋樣品后重新測定，并將稀釋倍數帶入公式。

8、如果樣品顏色較深，滴定終點不易觀察，應采用電位滴定法。

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