HotStart Bst 4.2 L-HNB Bead試劑

HotStart Bst 4.2 L-HNB Bead試劑該制品為全體系凍干微球制品，包含了 HotStart

Bst4.2 DNA/RNA 聚合酶、Helicaser、dNTP、Mg2+、反

應緩沖、L-HNB 變色指示劑(Leuco-HNB, 隱色 HNB 染

料)，其它穩定劑。

Bst4.2 具有以下性能：（1）Bst 4.2 全系包含熱啟動

Aptamer，該配體確保酶在<30℃時，酶活封閉效率>95%,

在>60℃時 1min 內釋放酶活。該特性利于室溫建立反

應體系，并大幅降低了低溫條件下的非特異擴增；（2）反

應溫度提升到 70℃，大幅降低引物 Dimer 的形成，提高

擴增特異性，并使得粗樣品核酸釋放更加充分；（3）全系

包含 Helicaser，因此，允許在不使用 F3/B3 引物的情況下

進行 LAMP 擴增（easy LAMP），并允許 FIP/BIP 的引物

用量降低一倍。這將進一步降低非特異擴增，并使得擴增

均一性大幅提升。

制品中的 L-HNB 染料在反應起始前與 Mg2+結合產

生深紫羅蘭色，隨著 LAMP 反應的進行，產生的 PPi（無

機焦磷酸鹽）結合體系中的 Mg2+，使得 L-HNB 顯示出

淡綠色。

(L-HNB-Mg2+復合物) -> (PPi-Mg2+)+ (L-HNB)

 深紫羅蘭色 淡綠色

名 稱 100T

HotStart Bst 4.2 L-HNB Bead 100 個

儲存：-20℃干燥密封保存 24 個月；室溫（25℃）密封保

存 12 個月。避免受潮。

特殊說明：

（1） Bst4.2 DNA/RNA Polymerase 在用于 LAMP 擴增時

的推薦反應溫度為 65-70℃，最佳反應溫度為 70℃。因此

其可替代 HaiGene 的 Bst4.0 系列，用于標準 LAMP

的擴增。

（2） 由于 Helicaser 的反應溫度為 70℃，因此在進行

eLAMP 擴增時，反應溫度為 70℃。

（3）制品中包含高濃度的鹽組分，使用時做好個人防護，

防止制品與皮膚、眼、鼻、呼吸道等接觸和吸入，一旦接

觸或吸入，請用大量的清水沖洗。

（4）防止氣溶膠污染，盡可能進行分區操作。

1. 標準 LAMP 和 eLAMP 擴增的區別

本試劑既可以用于標準 LAMP 擴增，也可以用于 eLAMP

擴增。

1.1 10x 標準 LAMP Primer Mix

FIP/BIP=16 μM each; LF/LB=4 μM each; F3/B3=2 μM each

1.2 10xeLAMP Primer Mix

FIP/BIP=8 μM each; LF/LB=4 μM each

注意：eLAMP（easy LAMP）為去除 F3/B3 引物的方法，

為 Bst4.2 系列專用的使用策略，對于大多數引物組，在

Helicaser 的加持下，擴增速度幾乎不受影響。如引物擴

增效率低，可提高 FIP/BIP 濃度到 12~16 μM。

1.3 擴增溫度不同

標準 LAMP 擴增 eLAMP 擴增

65-70°C 均可 70°C 反應

2. 配制 LAMP 反應體系

HotStart Bst 4.2 L-HNB Bead 1 個

10x Primer Mix 2.5 μl

模板 DNA/RNA X μl

ddH2O 到總體積 25 μl

反應體系配好后，置于 65-70°C 反應 20~30min，反應完

畢后觀察顏色，紫色為陰性，綠色為陽性擴增。

注意事項：

（1）本制品在 1x 濃度情況下，對如下試劑的耐受度，

Tris-HCl（pH8.0）≦10 mM; NaOH≦1 mM; Tween20%

≦1%； EDTA(pH8.0) ≦20 μM； 肝素≦0.5 IU/ml。

（2）L-HNB 是還原狀態下的染料，任何強氧化劑（H2O2、

次氯酸鈉等）均會破壞 L-HNB 的結構，從而直接導致試

劑變為深藍綠色。

恒溫擴增使用策略及實例展示

應用實例1：在以A3824-03或 A3828-03，用 LP1002引物組進行的LAMP測試。Bst4.0 SYBR Green試劑可在標準定量PCR儀或恒溫熒光儀上進行反應。以體外轉錄RNA為模板，1-6分別為1、10、100、1000、10e4和10e6Copies，NTC為ddH2O為模板。下圖為65℃反應25min的檢測結果，可以看到檢測反應<20min(達平臺期)。

應用實例2： 用 LP1002引物組進行的LAMP測試。OG變色法為終點變色策略，在反應結束后，倒置反應管，溶解管蓋上染料后，陽性樣本呈現出醒目的綠色，陰性表現出橙色，區分明顯。且該方法不受樣本類型限制，雜質耐受性很好。以體外轉錄RNA為模板，1-6分別為1、10、100、1000、10e4和10e6Copies，NTC為ddH2O為模板。下圖為65℃反應20min后檢測結果。

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