Bst 4.0 SYBR Green Bead試劑

Bst 4.0 SYBR Green Bead試劑該制品為全體系凍干微球制品，內(nèi)含恒溫擴增所用

的反應(yīng)緩沖液、SYBR Green 熒光染料、Mg

2+、dNTP、

Bst 4.0 DNA/RNA 聚合酶等，使用時只需要加入引物、

模板即可進行核酸恒溫擴增。Bst 4.0 DNA/RNA 聚合酶

具有依賴于 RNA 模板的聚合酶活性（逆轉(zhuǎn)錄），還具有依

賴于 DNA 的聚合酶活性，因此無論 DNA 或 RNA 樣本均

可使用該制品進行恒溫擴增。該制品是進行 LAMP 及

RT-LAMP 擴增反應(yīng)的試劑。

SYBR Green 系列產(chǎn)品為實時熒光檢測的專用試劑，

可直接在恒溫?zé)晒鈨x或定量 PCR 以上進行 LAMP 反應(yīng)擴

增。

貨 號 名 稱 規(guī)格

A3828-03 Bst 4.0 SG Bead 100 個

儲存：-20℃保存 2 年；室溫（25℃）保存>6 個月。

使用凍干微球進行全擴增體系用品的制備方法：將優(yōu)化的

擴增引物分裝于 0.2 ml EP 管底部，于 70-80℃條件烘干

1-2h。烘干后的 0.2 ml EP 管已經(jīng)含有干燥的擴增引物，

再加入一粒凍干微球即可制備成全擴增體系干燥品，該干

燥品無需冷鏈運輸，可長期保存。

反應(yīng)體系說明：每一個凍干微球為按照 25 μl 反應(yīng)體系建

立，在使用時只需要加入 25 μl 的 ddH2O 或模板即可進

行反應(yīng)。

使用實例，進行 LAMP 熒光擴增

1. 配制熒光 LAMP 反應(yīng)體系

在 0.2 ml EP 反應(yīng)管中加入下述試劑

Bst 4.0 SG Bead 1 粒

10xLAMP Primer Mix 2.5 μl

模板 DNA/RNA X μl

ddH2O 到液體總量 25 μl

10xLAMP Primer Mix 濃度：FIP/BIP 分別為 16 μM、

LoopF/B 分別為 4-8 μM、F3/B3 分別為 2 μM。

2. 反應(yīng)體系配好后，置于熒光定量 PCR 儀中于 65°C

進行反應(yīng) 15~30min。1min 收集一次熒光信號。讀取擴增

曲線進行陰性和陽性判讀。

3. 根據(jù)熒光擴增曲線判讀陽性和陰性。

注意事項：

（1）關(guān)于礦物油的使用，在配制完 LAMP 反應(yīng)體系后，

可加入一滴礦物油覆蓋于反應(yīng)液上部，可以有效的減少氣

溶膠的污染。實驗證明礦物油并不影響機器的熒光數(shù)值讀

取。

（2）關(guān)于擴增曲線的異常：由于 LAMP 擴增速度較快，

熒光信號讀取可能存在矯正計算問題，這與熒光設(shè)備的軟

件算法有管。在有些熒光 PCR 儀上，在相對熒光模式下，

表現(xiàn)出曲線飛峰、終點曲線下降的問題。此時調(diào)整到原始

熒光值模式下觀察結(jié)果，或致電相應(yīng)設(shè)備供應(yīng)商進行咨

詢。

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