Bst 4.0 Basic Mix (液體預(yù)混)試劑

Bst 4.0 Basic Mix (液體預(yù)混)試劑為單一組分的 MasterMix（2 倍濃度），包含了

反應(yīng)緩沖液、Mg

2+、dNTP、Bst 4.0 DNA/RNA 聚合酶等，

使用時(shí)只需要加入引物、模板即可進(jìn)行核酸恒溫?cái)U(kuò)增。Bst

4.0 DNA/RNA 聚合酶具有依賴于 RNA 模板的聚合酶活性

（逆轉(zhuǎn)錄），還具有依賴于 DNA 的聚合酶活性，因此無論

DNA 或 RNA 樣本均可使用該制品進(jìn)行高效的恒溫?cái)U(kuò)增。該

制品是進(jìn)行 LAMP 及 RT-LAMP 擴(kuò)增反應(yīng)的試劑。優(yōu)化

的反應(yīng)體系，確保快速的完成檢測試劑的反應(yīng)體系建立。

該系列產(chǎn)品不包含任何其它輔助染料，在 LAMP 的擴(kuò)增

搭配 OG 橙綠變色管進(jìn)行可視化變色反應(yīng)。除此外，該制品

還可以用于其它恒溫?cái)U(kuò)增實(shí)驗(yàn)，包括 CPA、SMAP 等。

組分

貨 號(hào) 名 稱 規(guī)格

A3824-02 2xBst 4.0 Basic Mix 1ml

儲(chǔ)存：長期保存制品于-20℃，保存 2 年。

使用實(shí)例（以 LAMP OG 橙綠變色為例）

橙綠變色染料（OG Dye）以凍干的形式預(yù)加在 8 聯(lián)管蓋

上（A3821）。在 LAMP 反應(yīng)完畢后（在反應(yīng)完畢前，務(wù)

必不能將管蓋上染料混入反應(yīng)液中），將 0.2ml EP 管顛倒

溶解 OG 染料后。LAMP 的反應(yīng)產(chǎn)物將與 OG 染料形成強(qiáng)

烈的綠色肉眼可見變色反應(yīng)（陽性），而未發(fā)生擴(kuò)增的 EP

管為深橙色（陰性）。

（1）配制反應(yīng)體系

在 0.2ml EP 反應(yīng)管中加入下述試劑

2xBst 4.0 Basic Mix 10 μl

*10xLAMP Primer Mix 2 μl

模板 DNA/RNA X μl

ddH2O 到總體積 20 μl

*10xLAMP Primer Mix 濃度：FIP/BIP 分別為 16 μM、

LoopF/B 分別為 4 μM、F3/B3 分別為 2 μM

全部試劑加入完畢后，輕彈 EP 管底部后，再蓋上 OG 橙綠

變色管（蓋上管蓋后務(wù)必不能再劇烈混合與倒置，以防止將

管蓋上的 OG 染料溶解，OG 染料一旦混入反應(yīng)液中

將會(huì)終止 LAMP 反應(yīng)）。

實(shí)驗(yàn) LAMP Primer Mix 分別采用 1、1.5、2 μl，以陰

性不變色，陽性樣品正常變色為標(biāo)準(zhǔn)，作為后續(xù)測試用量。

（2）反應(yīng)體系配好后，置于 60~68°C（實(shí)驗(yàn)采用

65°C）進(jìn)行反應(yīng) 20~45min。（擴(kuò)增良好的引物組合，通

常 25min 即可變色，一般不超過 45min，實(shí)驗(yàn)設(shè)置

20、25、30、45min）。

（3）觀察結(jié)果：觀察結(jié)果時(shí)，盡可能不要與配制反應(yīng)空

間共用，以防止污染操作臺(tái)。將反應(yīng) EP 管倒置，并手腕

輕甩，反應(yīng)液浸泡 EP 管蓋上的 OG 染料，靜置 30s。再

將 EP 反應(yīng)管正置，并輕甩反應(yīng)液到 EP 管底部，此時(shí)擴(kuò)

增樣品將變?yōu)轷r艷肉眼可見綠色，而陰性未發(fā)生擴(kuò)增的管

將為深橙色。

注意事項(xiàng)

1. 在用于其它恒溫?cái)U(kuò)增反應(yīng)時(shí)（如 CPA、SMAP 等），

可參考如上策略進(jìn)行使用，反應(yīng)時(shí)間可能會(huì)需要調(diào)整。

2. 關(guān)于礦物油的使用，在配制完 LAMP 反應(yīng)體系后，可

加入一滴礦物油覆蓋于反應(yīng)液上部，以減少氣溶膠的污

染。

3. 鑒于特殊的生產(chǎn)工藝，HaiGene 全系恒溫?cái)U(kuò)增 Mix 系

列均不能進(jìn)行濁度分析。

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