*酶(CAT)檢測試劑盒(紫外微板法)

*酶(Catalase，CAT)又稱觸酶，是一類以鐵卟啉為輔基的結合酶，由四個相同亞單位組成的四聚體酶，共含4分子的亞鐵

血紅素作為輔基，分子量約為24KD，CAT能將細胞代謝產(chǎn)生的毒性物質*迅速清除，可與GSH-Px共同保護巰基酶、

膜蛋白、*解離。

*酶(CAT)檢測試劑盒(紫外微板法)其檢測原理是血清或血漿等樣本在最佳酶反應條件下，反應后剩余的H2O2

與鉬酸銨形成穩(wěn)定的黃色復合物，其黃色深淺與酶活性成反比，通過酶標儀測定405nm處吸光度，該酶的檢測對于研究自由基

代謝平衡、抗衰老和腫瘤發(fā)病機制具有一定的價值，100T試劑盒可檢測46~50個樣本。該試劑盒僅用于科研領域，

不適用于臨床診斷或其他用途。

操作步驟(僅供參考)：

自備材料：

1、蒸餾水

2、電子天平、研缽或勻漿器、離心管或試管

3、低溫離心機、恒溫箱或水浴鍋、酶標儀、酶標板

操作步驟(僅供參考)：

1、準備樣品∶

①植物樣品︰取1g植物組織或水果中層果肉，加入2.5ml PAL Lysis Buffer，冰浴情況下充分搗碎研磨或勻漿，4℃ 10000r/min

離心15~20min，留取上清液，-20℃凍存，用于苯丙氨解氨酶的檢測。

②血漿、血清和尿液樣品︰血漿、血清按照常規(guī)方法制備后可以直接用于該試劑盒的測定，-20℃凍存，用于苯丙解氨的檢測。

③細胞或組織樣品∶取恰當細胞或組織裂解液，如果有必要需進行適當勻漿，4℃ 10000r/min離心15~20min，取上清液，

-20℃凍存，用于苯丙酸解氨酶的檢測。④高活性樣品︰如果樣品中含有較高活性的苯丙解氨酶，可以使用蒸餾水或PAL

Lysis Buffer稀釋進行恰當?shù)南♂尅?/span>

2、PAL加樣∶

取96孔板，按照下表設置對照孔、測定孔，溶液應按照順序依次加入，并

注意避免產(chǎn)生氣泡。如果樣品中的PAL活性過高，可以減少樣品用量或適當稀釋后再進行測定，樣品的檢測最好能設置2平行孔，

求平均值。

加入物（μl）對照孔測定孔

蒸餾水150100

待測樣本5050

PAL Assay Buffer-50

3、PAL檢測︰

以對照孔為對照(調零)，酶標儀立即測定290nm處測定孔的吸光度(記為   A測定0);40℃準確孵育1h，立即加入10μl PAL終止

液終止反應(備選方案)，以對照孔為對照調零，酶標儀立即測定290nm處測定孔的吸光度(記為A測定1)。

注意︰加入PAL終止液終止反應為非必須步驟，可37℃準確孵育1h后直接以對照孔為對照調零，酶標儀立即測定290nm處測定

孔的吸光度。

注意事項∶

1、待測樣品中不能含有酶抑制劑，同時需避免反復凍融。

2、獲得上清液為PAL酶液，應盡快檢測，亦可-20°℃保存。

3、如果沒有可測定紫外區(qū)的酶標儀和酶標板，也可以使用紫外分光光度計和石英比色皿，但應注意比色杯的最小檢測體積。

4、每次檢測指標不宜過多，否則操作時間不一，有可能導致樣本間的差異。5、為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

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