腦脊液總蛋白檢測(cè)試劑盒鉬微板法

腦脊液(Cerebro-Spinal Fluid,CSF)是存在于腦室、蛛網(wǎng)膜下腔和脊髓中央管內(nèi)的無色透明液體，由腦室中的脈絡(luò)叢產(chǎn)生，

與血漿和淋巴液的性質(zhì)相似。正常成年人的腦脊液約100~150ml，弱堿性，不含紅細(xì)胞。正常腦脊液具有一定的化學(xué)成

分和壓力，對(duì)維持顱壓的相對(duì)穩(wěn)定有重要作用，當(dāng)中樞神經(jīng)系統(tǒng)受損時(shí)，腦脊液的檢測(cè)成為重要的輔助診斷手段。總蛋白

(Total Protein，TP)由白蛋白和球蛋白組成，對(duì)于生物體液(血清、尿液、腦脊液)中總蛋白質(zhì)含量的測(cè)定，

一般要基于如下兩個(gè)假設(shè)：1、所有蛋白質(zhì)分子由純多肽組成，含氮量的質(zhì)量百分比為16%；

2、體液中含有數(shù)百個(gè)蛋白質(zhì)分子，每個(gè)分子對(duì)測(cè)定反應(yīng)都具有非常相似的特性；目前常用的方法有：雙縮脲法、

紫外分光光度法、染料結(jié)合法、凱氏定氮法、沉淀法等。

腦脊液總蛋白檢測(cè)試劑盒鉬微板法其檢測(cè)原理是在酸性條件下，首先鄰苯三酚紅和鉬酸絡(luò)合形成紅

色復(fù)合物，該復(fù)合物與蛋白質(zhì)形成復(fù)合體，其吸收峰移至604nm，通過酶標(biāo)儀比色法求出樣本中蛋白質(zhì)的含量，專門用于

人或動(dòng)物腦脊液樣本中的總蛋白含量測(cè)定，但易受表面活性劑影響。該試劑盒僅用于科研領(lǐng)域，不適用于臨床診斷或其他

用途。

操作步驟(僅供參考)：

1、取內(nèi)徑為8mm的玻璃試管2支，分別加入白陶土-腦磷脂混懸液0.2ml。

2、靜脈采血1ml，立即取下針頭，沿管壁向各試管注入血液0.5ml，立即混勻并啟動(dòng)秒表計(jì)時(shí)，并置于37℃水浴中。

3、每隔10s輕搖試管一次，觀察管內(nèi)血液流動(dòng)情況，直至血液凝固。記錄血液凝固所需時(shí)間，即為ACT。

4、取2支試管血液凝固時(shí)間的平均值作為ACT 值。

計(jì)算：參考區(qū)間： (1.77±0.76)min

4、配制標(biāo)準(zhǔn)品工作液︰如果檢測(cè)血清、尿液等樣品，按取丙酮酸標(biāo)準(zhǔn)(6mg/ml):蒸餾水=1：99的比例配制，使?jié)舛冗_(dá)到60μg/ml，如果檢測(cè)組織樣品按丙酮酸標(biāo)準(zhǔn)(6mg/ml) :組織勻漿液(1×)=1:99的比例配制，使?jié)舛冗_(dá)到60μg/ml。

注意事項(xiàng):

1、實(shí)驗(yàn)材料應(yīng)盡量新鮮，如取材后不立即使用，應(yīng)存于-20°C.

2、實(shí)驗(yàn)用蒸餾水不能含有二氧化碳，可用新煮沸且冷卻后的蒸餾水，并蓋緊口。

3、TA滴定液為堿性溶液，有腐蝕性，請(qǐng)小心操作。

4、TA標(biāo)定液容易長菌，宜4℃保存，一旦發(fā)現(xiàn)有絮狀物請(qǐng)棄用。

5、果實(shí)中含酸量較少時(shí)可將TA滴定液適當(dāng)稀釋后使用，可考慮用0.01~0.05M  TA滴定液進(jìn)行滴定。

6、TA滴定液含量計(jì)算公式中，V0最好為3次空白測(cè)定的平均值。

7、如果所測(cè)樣品的濃度過高，應(yīng)用TA Lysis Buffer工作液稀釋樣品后重新測(cè)定，并將稀釋倍數(shù)帶入公式。

8、如果樣品顏色較深，滴定終點(diǎn)不易觀察，應(yīng)采用電位滴定法。

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