基因敲除細胞系如何構建

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基因敲除細胞系構建服務：助力精準探索與技術創新

隨著基因組學和分子生物學的快速發展，基因敲除技術已成為探索基因功能、研究疾病機制和開發新藥的重要工具?；蚯贸毎底鳛樵摷夹g的核心產品之一，廣泛應用于學術研究、藥物篩選及疾病模型的構建等領域。今天就為大家分享一下基因敲除細胞系構建流程。

基因敲除細胞系構建的技術流程

1.目標基因選擇與設計敲除策略并制備敲除載體

2. 轉染或轉導

3. 篩選與驗證

4. 單克隆篩選

5. 基因敲除驗證

基因敲除細胞應用

敲除細胞作為重要的研究模型，廣泛應用于探究基因功能、疾病機制和藥物靶點篩選。通過模擬基因缺失對細胞行為的影響，可以揭示特定基因在生物學過程中的作用以及它們在疾病發展中的關鍵性。

基因敲除（KO）細胞系正是CRISPR/Cas9介導基因編輯中最典型的應用之一。以下是KO細胞系的主要應用方向：

抗體特異性驗證

抗體是生命科學中使用泛的試劑之一，但目前缺少統一的特異性驗證標準。未驗證的抗體容易產生非特異性結果，影響實驗可重復性。KO細胞系可作為抗體特異性驗證的重要工具，通過與野生型細胞平行對照，為試劑質量把關。未來，KO細胞系有望成為抗體驗證的行業標準。

確定參與通路的基因

一條信號通路通常涉及多個分子與過程?；蚯贸毎捎糜隍炞C特定基因或突變的功能。例如，JAK1基因在細胞因子信號傳導和腫瘤轉移中發揮關鍵作用。敲除JAK1后，STAT磷酸化水平可通過Western blot檢測是否發生變化，從而確定其在信號轉導過程中的作用。

確定藥物靶點

研究通路中基因功能常用藥理學干預結合基因編輯的方法。以6-硫鳥嘌呤（6-TG）為例，該藥物依賴DNA錯配修復（MMR）系統發揮作用。通過HPRT和目標基因的聯合敲除，可篩選6-TG的耐藥性細胞，進而驗證藥物作用機制及潛在靶點。

建立疾病模型

基因敲除（KO）細胞系是通過基因編輯技術刪除或失活特定基因，幫助研究人員深入理解基因在細胞功能、發育以及疾病中的作用。在疾病模型的建立中，KO細胞系提供了一個強大的工具，能夠模擬特定的基因缺失或突變，進而幫助研究疾病的分子機制，開發新藥，甚至測試治療方案。

開發治療工具

近年來，多個基因編輯臨床試驗相繼展開。包括基于基因敲除的CAR-T細胞、敲除BCL11A增強子提升γ球蛋白表達，用于治療鐮刀狀細胞病和β-地中海貧血。目前，已有多項臨床試驗嘗試敲除T細胞PD-1基因，應用于前列腺癌、食管癌、腎細胞癌等治療，這些試驗被視為體外CRISPR/Cas9基因敲除技術在癌癥治療中概念驗證的重要突破。

雅吉生物的優勢

雅吉生物依托強大的基因編輯平臺和豐富的技術經驗，能夠為客戶提供從基因靶點設計、載體構建到細胞系驗證的一站式服務。無論是基礎研究中的小規模定制需求，還是大規模藥物篩選中的高通量構建，我們都能夠為客戶提供高效、精準的解決方案。