4個(gè)步驟帶你拿捏流式細(xì)胞術(shù)

第一步

設(shè)計(jì)你的流式細(xì)胞實(shí)驗(yàn)

很多同學(xué)在實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的時(shí)候就埋下了隱患，最常見的問(wèn)題就是——對(duì)照設(shè)置不合理，最后導(dǎo)致整體實(shí)驗(yàn)失敗或數(shù)據(jù)不理想。

流式對(duì)照至少有 5 種。

生物學(xué)對(duì)照，空白對(duì)照，同型對(duì)照（Isotype control），補(bǔ)償對(duì)照（也叫單陽(yáng)性對(duì)照）和 FMO 對(duì)照，主要目的是為了避免出現(xiàn)的假陽(yáng)性或

假陰性結(jié)果。

第二步

細(xì)胞懸液樣本制備

流式細(xì)胞術(shù)的分析檢測(cè)建立在單個(gè)細(xì)胞的基礎(chǔ)上，所以制備合格的單個(gè)分散的細(xì)胞懸液是非常關(guān)鍵的一環(huán)。

對(duì)不同來(lái)源和不同形式的樣品，根據(jù)各種樣品的特點(diǎn)可選擇不同的分散方法。

單層培養(yǎng)細(xì)胞、血液、各種脫落細(xì)胞等樣品

標(biāo)本經(jīng)過(guò)簡(jiǎn)單的制備懸液，離心分離處理，就可以得到分散較好的單個(gè)細(xì)胞懸液，是理想的流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)對(duì)象。

不同組織來(lái)源的實(shí)體組織標(biāo)本

采用酶消化法、機(jī)械法和化學(xué)試劑處理法來(lái)分散細(xì)胞。

石蠟包埋組織單細(xì)胞懸液

可使大量存檔的臨床資料重新得到研究與利用，從而擴(kuò)大了流式細(xì)胞術(shù)的應(yīng)用范圍。樣品制備一般通過(guò)切片、脫脂、水化、消化及終止消化后過(guò)濾再收集細(xì)胞懸液，去除碎片的單細(xì)胞懸液用 70％ 乙醇固定保存。

第三步

流式檢測(cè)操作流程

很多同學(xué)第一次操作流式細(xì)胞儀器的時(shí)候非常緊張，生怕哪一步做錯(cuò)，弄壞了上百萬(wàn)的實(shí)驗(yàn)設(shè)備。儀器的操作確實(shí)有很多講究，比如：

「檢查供液槽和廢液槽：供液槽應(yīng)含足夠的儀器緩沖液，廢液槽應(yīng)在上次使用后清洗干凈。

第四步

流式檢測(cè)結(jié)果分析

實(shí)驗(yàn)結(jié)果圖通常有一維直方圖、二維點(diǎn)圖、等高線圖、密度圖等幾種。