DPPH自由基清除率檢測試劑盒(比色法)操作方法

DPPH自由基清除率檢測試劑盒(比色法)

一、產品簡介：

在生命活動的代謝過程中不斷產生各種自由基而自由基的積累會使機體產生氧化損傷而引起衰老、腫瘤、中風、心肌炎和糖尿病等慢性疾病，在眾多自由基中2，2-二苯基-1-苦基苯肼( DPPH)是一種較穩定的自由基，當有自由基清除劑存在時顏色由紫色向黃色轉變，吸光度隨之變小。

雅吉生物 DPPH自由基清除率檢測試劑盒(比色法)又稱氮自由基清除能力檢測試劑盒或氮自由基清除率檢測試劑盒，其檢測原理是DPPH自由基是一種較穩定的含氮自由基，含一個單電子，溶于乙醇后溶液呈紫色，在517nm下有強吸收，如果有其他物質提供一個電子與此單電子配對，溶液會褪色，褪色程度與接受電子的量呈正比，通過吸光度下降的程度來反應樣品的氮自由基清除能力，主要用于檢測血清、植物組織、抗氧化類食品、保健品及藥品等樣本。該試劑盒僅用于科研領域，不適用于臨床診斷或其他用途。

二、產品組成：

三、自備材料：

1、蒸餾水、無水乙醇

2、實驗材料∶植物組織(芹菜、綠豆、玉米等葉片)、血液、組織樣本等

3、研缽或勻漿器或粉碎機或超聲破碎機

4、離心機、離心管

5、恒溫水浴鍋、恒溫干燥箱

6、電子天平、30~50目篩

7、分光光度計、比色皿

四、操作步驟(僅供參考)：

1、準備樣品∶

①植物樣品∶取新鮮植物樣本，清洗干凈，研缽研碎(粉碎)，干燥箱烘干后過篩，稱取0.05g 樣品，加入0.8ml氮自由基提取液，40℃水浴浸提30~60min，10000rpm離心10min，上清液待用，4℃保存備用(亦可參考相關資料提取方法提取)。

②血漿、血清和尿液樣品︰血漿(用肝素或枸櫞酸鈉抗凝，不宜使用EDTA 抗凝)4°℃5000rpm離心10min，取上清液待用;血清或尿液樣品可直接測定。

③細胞樣品︰按每5×10°個細胞加入0.8ml氮自由基提取液，超聲破碎(功率200W,超聲3s，間隔10s，重復30次)，10000rpm 離心10min，取上清液待用。

④果汁、葡萄酒等樣品︰按樣品∶氮自由基提取液=1∶9的比例震蕩混勻，10000rpm離心10min，上清液待用，4℃保存備用。

⑤高活性樣品︰如果樣品中有效濃度較高，可用提取液進行恰當的稀釋。

2、配制維生素C溶液︰將一支10mg維生素C充分溶解于1ml氮自由基提取液中，即成10mg/ml維生素C溶液;可分成0.1ml的小份，-20℃保存。

3、配制Vc標準工作液︰如需測線性關系，建議用氮自由基提取液將10mg/ml維生素C溶液稀釋至20、15、10、8、6、4、2μg/ml的Vc標準工作液;如需清除率約為100%的陽性對照，建議選用大于 30μg/ml 的Vc標準工作液。

4、分光光度計開機預熱 30min，調節波長517nm(500~530nm亦可)，無水乙醇調零。

5、DPPH加樣∶按照下表設置空白管、樣本測定管、樣本對照管、陽性對照管，溶液應按照順序依次加入，混勻，室溫避光靜置30min。

6、OD值測定∶將各管溶液依次加入到比色皿中，用分光光度計檢測各管吸光度值，依次記為A₀、A₁、A₂、A₃。

五、計算：

陽性對照·DPPH清除率(%)= (A₀- A₃)/A₀×100%

待測樣本·DPPH清除率(%)=[A₀-( A₁- A₂)]/A₀×100%

備注:

A₀=空白管的吸光度值

A₁=樣本測定管的吸光度值

A₂=樣本對照管的吸光度值

A₃=陽性對照管的吸光度值

六、注意事項：

1、正式測定之前建議選擇2~3個預期差異較大的樣本做預實驗。

2、實驗材料應盡量新鮮，當天提取當天測定。

3、不同樣本清除DPPH自由基的能力差異很大。

4、如樣本DPPH清除率大于90%，應用提取液稀釋；如樣本 DPPH清除率小于5%，應提高樣本用量以提高有效成分濃度。

5、樣品中不宜添加Triton、DTT等可能影響氧化還原反應的成分。

6、為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

七、有效期：6 個月有效。4℃運輸，4℃保存。